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飼料中L-肉堿的高效液相色譜(HPLC)檢測(cè)方案
添加時(shí)間:2016-07-21 17:16:58 瀏覽量:257
旋肉堿(L-肉堿)又稱肉毒堿,是一種水溶性氨基酸,由賴氨酸衍生而來(lái)。分子結(jié)構(gòu)為L(zhǎng)-γ-胺β-羥丁酸,分子式為 C7H16NO3,分子量為161.2。它是B族維生素類似物,曾被稱為維生素BT。其分子結(jié)構(gòu)中含有一個(gè)可供脂肪酸脂化的羥基,其飽和鍵有良好的水溶性和吸濕性,200℃以上它仍穩(wěn)定存在,可在PH3~6的溶液中放置一年以上而不變壞。1998年我國(guó)衛(wèi)生部將L-肉堿批準(zhǔn)為食品添加劑,列入 營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑類。我公司利用全新高性能LC-2010液相色譜儀,經(jīng)實(shí)踐檢測(cè)飼料中L-肉堿的含量,得出的結(jié)果準(zhǔn)確可靠,檢出限好,適用于飼料中L-肉堿的測(cè)定,供廣大用戶參考。
以下是飼料中L-肉堿的詳細(xì)檢測(cè)方法。
1 儀器與試劑
1.1 儀器
LC-2010液相色譜儀
色譜柱 C18 250mm×4.6mm×5μm
實(shí)驗(yàn)室常用儀器設(shè)備
超聲波水浴
分析天平(感量0.001g)
0.45μm水性濾膜
1.2 試劑
異丙醇,色譜純。
甲醇,色譜純。
乙腈,色譜純。
磷酸氫二鈉。
磷酸二氫鉀。
三乙醇胺。
檸檬酸。
氧化銀。
肉堿衍生劑。
2 測(cè)定原理
樣品經(jīng)加乙醇超聲提取后,然后加入肉堿衍生劑,將衍生物注入液相色譜反相柱上進(jìn)行分離,用紫外檢測(cè)器在210nm波長(zhǎng)處定量測(cè)定。
3 試樣溶液的制備
稱 取5g試樣于100ml燒杯中,加入30ml無(wú)水乙醇,溶解并轉(zhuǎn)移至100ml容量瓶中,先后用10ml無(wú)水乙醇分3次洗滌燒杯,樣液轉(zhuǎn)移至100ml容 量瓶中,超聲提取10min后用無(wú)水乙醇定容至刻度,混勻后于4000r/min離心5min。取上清液2ml,加入肉堿衍生劑0.25ml(衍生劑配制 方法:40 mg P-苯酰溴溶解于1.0 ml乙腈,加入百分之40 氫氧化四丁基銨50 μl),混合后置于60℃恒溫水溫箱120 min,吸取20 μl進(jìn)樣分析。
4 色譜條件
色譜柱:C18 柱 250mm×4.6mm×5μm;
流動(dòng)相:甲醇:磷酸鹽=5:95
流速:1.0mL/min;
溫度:室溫;
進(jìn)樣量:20μL;
檢測(cè)波長(zhǎng):210nm。
典型譜圖
05.jpg
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